考马斯亮蓝染色

时间: 2025-05-16 15:29:36

考马斯亮蓝染色是一种广泛应用于蛋白质检测的经典技术，其核心原理是通过染料与蛋白质的特异性结合实现可视化或定量分析。以下是该技术的详细解析：

一、染料类型与特性‌

G250与R250的区别‌

G250‌：游离态呈红棕色，结合蛋白质后变为蓝色，适用于快速染色（1-2小时）和定量分析（595nm波长检测）。

R250‌：呈蓝色带红色调，灵敏度更高但染色时间较长（通常需过夜），适合SDS-PAGE胶的精细染色。

结合机制‌

在酸性条件下，染料与蛋白质中的精氨酸、赖氨酸和组氨酸通过疏水作用结合。

二、实验步骤‌

染色流程‌

电泳分离‌：通过SDS-PAGE或非变性PAGE分离蛋白质。

染色‌：将凝胶浸入染色液（如G250的乙醇-磷酸溶液），摇动1小时（快速）或过夜（传统）。

脱色‌：使用脱色液去除背景染料，提高条带清晰度。

染色液配制‌

G250染液‌：100mg染料溶于50mL 95%乙醇，加100mL 85%磷酸，定容至1L后过滤。

三、应用场景‌

蛋白质检测‌

电泳评估‌：染色SDS-PAGE胶以确认蛋白分离效果或转膜效率。

Western Blot辅助‌：检测转膜后胶上残留蛋白。

定量分析‌

通过595nm吸光度测定蛋白质浓度（Bradford法）。

四、优缺点‌

优点‌：操作简便、成本低，可同时处理多个样本。

缺点‌：R250对酸/醇溶蛋白可能造成溶解损失。

五、改良与扩展‌

快速染色法‌：通过优化染料浓度或添加表面活性剂缩短时间。

多功能成像系统‌：结合化学发光成像设备提升检测效率。

如需具体实验方案或问题排查，可进一步细化需求。